MTT 溶液(5mg/ml)
產(chǎn)品簡介：
MTT 比色法是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。 MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測。 MTT 檢測原理在于活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍(lán)紫色 Formazan 并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。 在特定溶劑 (如 DMSO)存在的情況下，可以被*溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測定 570nm 波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。
產(chǎn)品組成：
名稱 規(guī)格 | 10ml | Storage |
MTT solution(5mg/ml) | 10ml | -20℃避光 |
產(chǎn)品說明書 | 一份 | |
自備材料：
1、 細(xì)胞培養(yǎng)液
2、 胰蛋白酶消化液
3、 低速離心機(jī)
4、 96 孔培養(yǎng)板
5、 細(xì)胞計(jì)數(shù)板或計(jì)數(shù)器
6、 DMSO 或 Formazan solvent
7、 搖床
8、 顯微鏡
9、 酶聯(lián)免疫檢測儀
操作步驟(僅供參考)：
1、 細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對數(shù)生長期， 常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞(懸浮細(xì)胞無需
消化)。
2、 低速離心，收集細(xì)胞沉淀。
3、 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。
4、 細(xì)胞接種于 96 孔培養(yǎng)板，一般接種密度為 3000～10000 /孔。通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔
加 3000 個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入 6000 個(gè)細(xì)胞即可。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)
目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。
5、 37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng) 6～24h。
6、 按照實(shí)驗(yàn)具體要求，給予 0～20ml 干預(yù)藥物處理，37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間。
7、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 10ml MTT solution 和 100ml 新鮮培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)
孵育 4h。
8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 110ml DMSO，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解 。
8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 110ml DMSO，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解 。
如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時(shí)間會短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時(shí)
間會長一些。
9、 在酶聯(lián)免疫檢測儀 570nm 測定 各孔吸光度。
注意事項(xiàng)：
1、 MTT solution(5mg/ml)盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效 ，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，
請勿使用。
2、 由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，應(yīng)注意蒸發(fā)問題。
3、 MTT solution 在低溫情況下會凝固，使用前請置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解
后使用。
4、 觀察 formazan 是否*溶解，亦可以借助 光學(xué)顯微鏡觀察。
5、 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)盡量細(xì)菌避免污染。
6、 應(yīng)注意設(shè)立 OD 調(diào)零孔和對照。
7、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期： 12 個(gè)月有效。
