確保充分的細胞生長是細胞培養(yǎng)和收集精-確數(shù)據(jù)的一個關鍵部分。對于單層生長的細胞，融合度定義為顯微鏡觀察到被一層細胞覆蓋的培養(yǎng)器皿表面積的百分比。比如，50%細胞融合是指一半的培養(yǎng)皿/瓶等的表面被細胞覆蓋。對于懸浮細胞，通常用細胞系或類型的細胞密度衡量其生長過程，但或許也可通過濁度增加和培養(yǎng)基顏色穩(wěn)定評估“融合“。

培養(yǎng)中的細胞生長一般發(fā)生在四個階段，隨著時間推移的細胞計數(shù)的對數(shù)形成一個S型曲線(S-型)，不同細胞系和培養(yǎng)物在每個階段需要的時間有很大差異。

1.停滯期：細胞適應培養(yǎng)條件的階段，細胞在此階段不分裂。細胞通常在起始培養(yǎng)后的24小時內(nèi)附著，該階段的總時長取決于培養(yǎng)之初使用細胞的生長階段和接種密度。

2.對數(shù)期：細胞在此階段積極分裂，是評估群體生長和通用數(shù)據(jù)收集的-佳時間。對數(shù)期的后期，過度擁擠導致細胞脅迫之前是傳代細胞(亞培養(yǎng))的-佳時機。

3.平穩(wěn)期：隨著細胞達到100%融合，細胞在此階段生長放緩，不足1/10的細胞處于活躍細胞周期。細胞在此階段容易受傷，因此需要小心觀察以確保細胞在此階段之前或之初進行傳代。

4.衰退期：細胞周期的自然組成部分。在此階段，隨著細胞死亡占據(jù)主導地位，活細胞群體數(shù)量減少。

評估細胞生長

準確的細胞計數(shù)對評估培養(yǎng)的細胞生長是至關重要，因為錯誤的計數(shù)會導致關于細胞健康的錯誤結(jié)論。細胞計數(shù)可以使用血球計數(shù)板、自動計數(shù)器進行。

預防和消除細胞生長問題的常規(guī)技巧和技術(shù)

1.除了遵循良好的無菌操作實踐以防止微生物和化學污染外，細胞生長問題的早期診斷和處理的關鍵是對培養(yǎng)物的頻繁觀察和詳細的記錄保存。

2.同樣重要的是需要考慮解決問題-有效的方式是詳細和耗時的尋找細胞生長不佳的罪魁禍首，還是-好簡單地使用新的試劑、儲存液和物資重新開始。

仔細地觀察

為了解決細胞生長問題，必須首先意識到問題的存在。許多生長問題都是微妙的，所以定期、詳細的觀察實驗中所有培養(yǎng)器皿是非常必要的。顯微鏡下的快速評估可能是不夠的，許多特殊的生長模式在細胞固定和染色之前并不明顯。另外，仍需定期檢查培養(yǎng)基和其他試劑是否污染。

精-確記錄

當試圖診斷和解決細胞生長不良的問題時，擁有關于培養(yǎng)各個方面的好筆記可以節(jié)省時間、金錢和珍貴的修飾細胞如敲除細胞系。比如，標準化細胞密度、記錄儲存細胞的傳代次數(shù)對判斷儲存液是否可能為問題來源至關重要。同樣，在得出某批次培養(yǎng)基是罪魁禍首的結(jié)論之前，必須首先確保哪些培養(yǎng)皿使用了這一批次。

需要記錄的重要信息包括所有凍存管的來源、身-份證明、無污染、傳代次數(shù)、細胞密度、冷凍和儲存方法等。使用的所有試劑的成分和濃度、批號、*打開和使用日期都應該記錄下來。所有培養(yǎng)器皿的批號也應該記錄。細胞培養(yǎng)個方面的詳細實驗步驟應該標準化和遵循，所有凍存管和培養(yǎng)器皿的精-確和詳細標簽都是至關重要的。注意小細節(jié)，比如培養(yǎng)箱清理和保養(yǎng)的時間、CO2罐更換的時間、培養(yǎng)室后篩查支原體的時間，并記錄任何異常的事件。

知道何時止損

有時，發(fā)現(xiàn)問題的確切來源不像解決它那么重要，因此，立即修復多個潛在的導致生長不良的原因比嘗試隔離確切的問題更節(jié)約時間和成本。比如，使用新的儲存細胞和所有新的培養(yǎng)基、血清、緩沖液等重新開始，比分別獨立嘗試各物料的新批次直到發(fā)現(xiàn)罪魁禍首更合乎情理。